胰腺导管腺癌（PDAC）死亡率较高、生存率较低，而临床症状通常在疾病晚期才显现出来，因此肿瘤早期即明确诊断至关重要。然而，目前还没有可靠的筛查工具来识别高危患者。近年来，循环肿瘤DNA(ctDNA)甲基化逐渐成为一项新的潜在检测手段，可以将PDAC血浆与正常血浆进行区分，有助于早期筛查诊断。

 

研究设计分为标志物筛选、分析优化、模型训练和验证（图1）。在46例PDAC组织、30例PDAC旁组织和20例PDAC血浆中构建亚硫酸氢盐测序库，并通过量化和比较这些组之间基因组区域和单个CpG位点的甲基化水平，筛选PDAC特异性标志物。在84例PDAC患者和64例正常对照组的血浆样本中对标志物进行验证，从而建立一种血液分类器。最好的标志物被开发成一个靶向测序小组，对来自各种胰腺疾病患者的大量血浆样本进行测试，以建立和验证PDAC预测模型。

 

图1. 研究设计

 

研究队列中患者的特征见图2。研究人员分析组织样本的全基因组甲基化模式来验证171个PDAC特异性标志物。利用SVM方法对PDAC分类模型进行反复训练和交叉验证，平均灵敏度为86%，特异性为88%。为了证明血浆无创检测的可行性，用这些标志物对PDAC和正常血浆进行了甲基化检测，平均灵敏度为68.4%，特异性为85.8%。为了更有效地检测，研究人员通过选出最能分辨出肿瘤和正常组织的标志物，从而构建一个标志物数量更少的亚组，并在一个含有200例血浆样本（其中包括来自多个中心的PDAC、慢性胰腺炎和正常人）的独立队列研究中对标志物亚组进行验证。当鉴别PDAC和正常人时，标志物亚组的AUC高于0.90，当鉴别PDAC和慢性胰腺炎时，AUC为0.88。（图3，图4）

 

图2. 研究队列患者的特征

 

图3. 初步模型：鉴别PDAC血浆与正常对照组和慢性胰腺炎

 

图4. 组合标志物：CA19-9和ctDNA甲基化

 

本研究通过对PDAC组织和血浆的筛选和验证，开发了一种基于二代测序的PDAC特异性DNA甲基化靶点检测方法。研究结果令人满意，可将PDAC从非恶性疾病中验证出来，作为基于血液的早期PDAC无创筛查，其具有很大的临床应用潜力。

 

来源：

118MO – X. Liu， Q. He， Z. Liang， H. Wu， et al. Circulating tumor DNA methylation are markers for early detection of pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC). ESMO Asia Virtual Congress 2020 (20-22 November).